ⅠNحمض اليوكليكiمقدمة
ينقسم الحمض النووي إلى حمض ديوكسي ريبونوكلييك (DNA) وحمض ريبونوكلييك (RNA)، حيث ينقسم الحمض النووي الريبي (RNA) إلى RNA الريباسي (rRNA)، وRNA المرسال (mRNA)، ونقل RNA (tRNA) وفقًا لوظائفه المختلفة.ويتركز الحمض النووي بشكل رئيسي في النواة والميتوكوندريا والكلوروفورم، في حين يتم توزيع الحمض النووي الريبي بشكل رئيسي في السيتوبلازم.باعتباره الأساس المادي للتعبير الجيني، يلعب استخراج الحمض النووي دورًا مهمًا للغاية في أبحاث البيولوجيا الجزيئية والتشخيص الجزيئي السريري.سيؤثر تركيز ونقاء استخلاص الحمض النووي بشكل مباشر على PCR اللاحق، والتسلسل، وبناء المتجهات، وهضم الإنزيمات والتجارب الأخرى.
Ⅱ طريقة استخلاص الحمض النووي وتنقيته
① طريقة استخلاص الفينول/الكلوروفورم
يعد استخراج الفينول/الكلوروفورم طريقة كلاسيكية لاستخراج الحمض النووي، والتي تستخدم بشكل أساسي مذيبين عضويين مختلفين لمعالجة العينات، وحل الحمض النووي القائم على الحمض النووي في الطور المائي، والدهون في الطور العضوي، والبروتينات بين المرحلتين.تتميز هذه الطريقة بمزايا التكلفة المنخفضة والنقاء العالي والتأثير الجيد.العيوب هي عملية معقدة ووقت طويل.
② طريقة تريزول
طريقة Trizol هي طريقة كلاسيكية لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA).تنقسم طريقة تريزول إلى مرحلة مائية ومرحلة عضوية بعد الطرد المركزي بالكلوروفورم، حيث يتم إذابة الحمض النووي الريبي (RNA) في الطور المائي، ويتم نقل الطور المائي إلى أنبوب EP جديد، ويتم الحصول على الترسيب بعد إضافة الأيزوبروبانول، ومن ثم تنقية الإيثانول.هذه الطريقة مناسبة لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA) من الأنسجة الحيوانية والخلايا والبكتيريا.
③ طريقة تنقية عمود الطرد المركزي
يمكن لطريقة تنقية عمود الطرد المركزي أن تمتص الحمض النووي على وجه التحديد من خلال مواد امتصاص مصفوفة السيليكون الخاصة، بينما يمكن للحمض النووي الريبي (RNA) والبروتين المرور بسلاسة، ثم استخدام درجة الحموضة العالية منخفضة الملح لدمج الحمض النووي، وشطف قيمة الرقم الهيدروجيني المنخفض الملح لفصل وتنقية الحمض النووي.المزايا هي تركيز التنقية العالي، الاستقرار العالي، عدم الحاجة إلى المذيبات العضوية، والتكلفة المنخفضة.العيب هو أنه يحتاج إلى الطرد المركزي خطوة بخطوة، والمزيد من خطوات التشغيل.
④ طريقة الخرز المغناطيسي
تتمثل طريقة الخرز المغناطيسي في تقسيم عينة أنسجة الخلية من خلال المحللة، وإطلاق الحمض النووي في العينة، ومن ثم يتم امتصاص جزيئات الحمض النووي بشكل خاص على سطح الخرزة المغناطيسية، بينما تبقى الشوائب مثل البروتينات والسكريات في السائل.من خلال خطوات تقسيم أنسجة الخلية، وربط الخرزة المغناطيسية بالحمض النووي، وغسل الحمض النووي، وشطف الحمض النووي، وما إلى ذلك، يتم الحصول أخيرًا على حمض نووي نقي.المزايا هي التشغيل البسيط والاستخدام لفترة قصيرة، دون الحاجة إلى الطرد المركزي المرحلي.لديها متطلبات تقنية منخفضة ويمكنها تحقيق التشغيل التلقائي والشامل.المزيج المحدد من الخرزة المغناطيسية والحمض النووي يجعل الحمض النووي المستخرج ذو تركيز ونقاء عاليين.العيب هو أن سعر السوق الحالي باهظ الثمن نسبيا.
⑤ طرق أخرى
بالإضافة إلى الطرق الأربع المذكورة أعلاه، هناك تكسير الغليان، وطريقة الملح المركز، وطريقة المنظفات الأنيونية، وطريقة الموجات فوق الصوتية والطريقة الأنزيمية، وما إلى ذلك.
Ⅲ نوع استخراج الحمض النووي
تمتلك Foregene منصة PCR المباشرة الرائدة عالميًا، ومنصة عزل الحمض النووي الريبي (RNA) ذات العمود المزدوج (DNA فقط + RNA فقط).وتشمل المنتجات الرئيسية مجموعات عزل DNA/RNA، وسلسلة الكواشف المخبرية الجزيئية PCR وDirect PCR.
① إجمالي استخراج الحمض النووي الريبي
تشمل عينات استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) الإجمالية الدم والخلايا والأنسجة الحيوانية والنباتات والفيروسات وما إلى ذلك. يمكن الحصول على درجة نقاء عالية وتركيز عالٍ من إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) من خلال استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) الكلي، والذي يمكن استخدامه في RT-PCR، وتحليل الرقائق، والترجمة المختبرية، الاستنساخ الجزيئي، Dot Blot وتجارب أخرى.
ذات الصلة بالجيناتمجموعات عزل الحمض النووي الريبي
مجموعة عزل الحمض النووي الريبي (RNA) للحيوان--بسرعة وكفاءة استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من الأنسجة الحيوانية المختلفة.
طقم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) للخلية--يمكن الحصول على الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من الخلايا المستنبتة المختلفة في 11 دقيقة.
طقم عزل الحمض النووي الريبي (RNA) للنبات--قم باستخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي الجودة بسرعة من العينات النباتية ذات المحتوى المنخفض من السكاريد والبوليفينول.
مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الفيروسي- عزل وتنقية الحمض النووي الريبي الفيروسي بسرعة من عينات مثل البلازما والمصل وسوائل الجسم الخالية من الخلايا والمواد الطافية لزراعة الخلايا.
② استخراج الحمض النووي الجيني
تشمل عينات استخراج الحمض النووي الجينومي التربة، والبراز، والدم، والخلايا، والأنسجة الحيوانية، والنباتات، والفيروسات، وما إلى ذلك. يمكن استخدام استخراج الحمض النووي الجينومي في هضم الإنزيمات، وبناء مكتبة الحمض النووي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل، وإعداد الأجسام المضادة، وتحليل تهجين اللطخة الغربية، ورقاقة الجينات، والتحليل العالي -تسلسل الإنتاجية والتجارب الأخرى.
ذات الصلة بالجيناتمجموعات عزل الحمض النووي
مجموعة عزل الحمض النووي للأنسجة الحيوانية- الاستخلاص السريع وتنقية الحمض النووي الجينومي من مصادر متعددة، مثل الأنسجة الحيوانية والخلايا وغيرها.
مجموعة الحمض النووي للدم (1-5 مل)--تنقية الحمض النووي الجينومي عالي الجودة بسرعة من الدم المضاد للتخثر (1-5 مل).
مجموعة عزل الحمض النووي لبطاقة اتفاقية التجارة الحرة/مسحة الشدق--تنقية الحمض النووي الجينومي عالي الجودة بسرعة من مسحة الشدق/عينات بطاقة اتفاقية التجارة الحرة.
مجموعة عزل الحمض النووي للنبات- تنقية الحمض النووي الجينومي عالي الجودة والحصول عليه بسرعة من العينات النباتية (بما في ذلك عينات نبات البوليفينول والسكريات)
③ استخراج البلازميد
البلازميد هو نوع من جزيء الحمض النووي الدائري الصغير الموجود في الخلايا، وهو حامل شائع لإعادة تركيب الحمض النووي.تتمثل طريقة استخلاص البلازميد في إزالة الحمض النووي الريبي (RNA)، وفصل البلازميد عن الحمض النووي الجينومي البكتيري، وإزالة البروتين والشوائب الأخرى للحصول على بلازميد نقي نسبيًا.
مجموعة البلازميد العامة الصغيرة--تنقية الحمض النووي البلازميد عالي الجودة بسرعة من البكتيريا المحولة لإجراء تجارب البيولوجيا الجزيئية الروتينية مثل التحول وهضم الإنزيمات
④ أنواع الاستخراج الأخرى، واستخراج ميرنا، وما إلى ذلك.
طقم عزل ميرنا الحيواني- استخراج أجزاء صغيرة من الحمض النووي الريبي (RNA) بسرعة وكفاءة من 20-200nt ميرنا، سيرنا، snRNA من الأنسجة والخلايا الحيوانية المختلفة
Ⅳ متطلبات استخراج الحمض النووي ونتيجة التنقيةs
① لضمان سلامة البنية الأولية للحمض النووي.
② تقليل تدخل البروتينات والسكريات والدهون والجزيئات الكبيرة الأخرى
③ يجب ألا يكون هناك مذيب عضوي أو تركيز عالي من أيونات المعادن التي يمكن أن تمنع الإنزيم في عينات الحمض النووي.
④ يجب التخلص من الحمض النووي الريبي (RNA) وغيره من تلوث الأحماض النووية عند استخراج الحمض النووي، والعكس صحيح.
وقت النشر: 24 نوفمبر 2022
